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關于PCR儀您了解多少?

瀏覽次數(shù):1161發(fā)布日期:2022-03-14
  PCR儀已成為一種潮流。反應時間從90分鐘縮短到30分鐘,是受歡迎的,畢竟誰也不想在預約時排隊等太久。溫度循環(huán)是所有PCR的基礎。變溫速率將決定PCR運行的整體速度。毫無疑問,變溫越快,PCR運行也越快。宣傳資料往往也會首先展示zui高變溫速率以暗示運行速度更快。因此,在拿到參數(shù)表時,我們先會留意變溫速率,也就是升降溫速率。當然,樣品的變溫速率可沒有模塊那么高。這就好比在爐子上燒水,爐子很快就達到100℃以上,但水可能只有50℃。模塊的熱量傳遞到樣品還需要一定的滯后時間。因此,只根據(jù)模塊溫度編程而不考慮樣品體積的變溫速率并不能算準確。這個參數(shù)能反應儀器根據(jù)體積來控制樣品達到設置溫度、遵循預設的實驗方案運行的真實能力,更有效地評估真實性能。
  PCR儀通常由熱蓋部件、熱循環(huán)部件、傳動部件、控制部件和電源部件等部分組成。在普通PCR儀設計基礎上增加熒光信號激發(fā)和采集系統(tǒng)和計算機分析處理系統(tǒng),形成了具有熒光定量PCR功能的儀器。其PCR擴增原理和普通PCR擴增原理相同,在PCR擴增時加入的引物是利用同位素、熒光素等進行標記,使用引物和熒光探針同時與模板特異性結(jié)合擴增。擴增的結(jié)果通過熒光信號采集系統(tǒng)實時采集信號連接輸送到計算機分析處理系統(tǒng),得出量化的實時結(jié)果輸出。
  有單通道,雙通道和多通道之分。當只用一種熒光探針標記的時候,選用單通道;有多種熒光標記的時候使用多通道。單通道也可以檢測多熒光的標記和目的基因表達產(chǎn)物,因為一次只能檢測一種目的基因的擴增量,需多次擴增才能檢測完不同的目的基因片段的量。多通道利于做多重PCR,實現(xiàn)一次檢測多種目的基因的功能。
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